问lb 培养基配方 配制操作与要点详解

lb 培养基全称是 Luria Bertani 培养基，是分子生物学实验最常用的细菌液体培养基，主要用来培养大肠杆菌，标准 lb 培养基配方核心由胰蛋白胨 酵母提取物 氯化钠三种基础组分构成，按照每升体系来称量配制，它属于通用富营养培养基，营养成分充足，可以满足大肠杆菌常规扩增 质粒提取 菌液活化这类基础实验需求，很多新手容易混淆液体 lb 和固体 lb，固体 lb 就是在基础配方之上额外添加琼脂粉，灭菌之后倒平板使用，同时还要注意，抗性 lb 培养基需要在灭菌降温之后再加入抗生素，不能和基础组分一起高压灭菌，否则抗生素会高温失活，整个配制过程 pH 调节 灭菌参数 储存条件都会直接影响菌生长状态，做实验的时候不能只记住配方，还要掌握完整配制流程和常见异常原因。

标准 1 升液体 lb 培养基配方表

固体 lb 培养基补充配方

在上面液体 lb 全部组分基础上，每升额外加入琼脂粉 15 到 20 克，琼脂作为凝固剂，灭菌之后温度降到 50 摄氏度左右可以倒平板，琼脂本身不提供营养，只负责让培养基凝固成固态。

详细配制步骤

第一步 准备烧杯，按照配方称量胰蛋白胨 酵母提取物 氯化钠，倒入烧杯里面

第二步 加入大约 800 毫升去离子水，磁力搅拌或者手动搅拌，让粉末充分溶解

第三步 使用氢氧化钠溶液调节 pH，目标 pH 调节到 7.0 到 7.2，这个是大肠杆菌最适合的酸碱度

第四步 继续补加去离子水，最终定容到 1000 毫升

第五步 分装到三角瓶或者试管，封口包扎，准备高压蒸汽灭菌

第六步 高压灭菌参数，121 摄氏度，20 分钟，这个是 lb 培养基常规灭菌条件

第七步 如果需要抗性 lb，等灭菌结束培养基降温到 50 摄氏度左右，无菌操作加入对应的抗生素，轻轻摇匀之后再倒平板或者分装保存

关键操作要点

氯化钠可以根据实验需求调整，部分低盐实验体系可以减少氯化钠用量，但是常规标准 lb 保持 10 克每升

抗生素高温会分解，氨苄青霉素 卡那霉素这类抗性试剂，绝对不能提前混进培养基一起高压灭菌

配好的未加抗生素 lb 液体培养基，灭菌之后可以室温短期存放，加了抗生素的 lb 培养基建议 4 摄氏度冷藏，并且尽快使用，防止抗生素降解

如果培养基出现浑浊沉淀，代表已经污染，不能继续用于实验

常见变体说明

无盐 lb 培养基，就是去掉氯化钠组分，适合特殊菌株培养，不属于标准 lb 配方

高抗性 lb，基础配方不变，只调整抗生素工作浓度，基础营养组分仍然是标准 lb 配方

【常见问题】

问题 1 lb 培养基配方里面为什么要调节 pH

回答 1 lb 培养基配方配制的时候调节 pH 到 7.0 到 7.2，是因为大肠杆菌最适合这个酸碱度，pH 偏离会抑制细菌生长，影响后续扩增效果。

问题 2 lb 培养基配方配制固体平板琼脂加多少

回答 2 lb 培养基配方做固体平板的时候，在液体 lb 基础配方上每升添加琼脂粉 15 到 20 克，琼脂只起凝固作用，不改变 lb 基础营养配比。

问题 3 lb 培养基配方能不能把抗生素和粉末一起高压灭菌

回答 3 lb 培养基配方配制抗性培养基的时候，抗生素不能和基础组分一起高压灭菌，高温会造成抗生素失活，必须灭菌降温之后无菌添加。

问题 4 lb 培养基配方标准体系是按多少升来称量

回答 4 lb 培养基配方通用标准是按 1 升体系称量，胰蛋白胨 10 克，酵母提取物 5 克，氯化钠 10 克，需要其他体积可以按比例缩放。

【免责申明】

本内容仅作为实验室培养基配制学习参考，不同实验菌株 特殊课题可能需要调整 lb 培养基配方与灭菌参数，正式实验请参照课题 SOP 以及菌株培养手册，本内容不对实验结果承担相关责任。